Zeitschrift für Chromatographie und Trenntechniken
Offener Zugang

Abstrakt

Entwicklung eines COL3A1-spezifischen Echtzeit-PCR-Tests für klinische und sportliche Erkennungsanwendungen

Martinez B, Jimenez A, Diaz T, Segura J und Ferro P*

PIIINP, dessen Gen COL3A1 ist, ist ein als Biomarker verwendetes Protein, das bei verschiedenen Pathologien wie Fettleber nichtalkoholischen Ursprungs verändert ist und auch verwendet wird, um den Missbrauch von rekombinantem menschlichem Wachstumshormon (rhGH) durch Spitzensportler zur Leistungssteigerung festzustellen. Daher könnte die Untersuchung der Werte dieses Proteins oder seines Gens neben anderen Anwendungen auch für die Diagnose dieser Pathologien nützlich sein. Das Ziel dieser Arbeit war die Entwicklung einer neuen Nachweismethode für das COL3A1-Gen, die auf der Quantifizierung von mRNA in Echtzeit basiert. 10 gesunden männlichen Freiwilligen wurde an drei aufeinanderfolgenden Tagen 0,026 mg-1kg-1Tag-1Person-1 rhGH intravenös injiziert, und Serum- und Blutproben wurden an sieben Tagen zu unterschiedlichen Zeitpunkten gesammelt. Die mRNA-Extraktion wurde nach Lymphozytenreinigung gemäß Standardprotokollen durchgeführt, und die Proben wurden durch quantitative Echtzeit-PCR unter Verwendung von TaqMan-Sonden quantifiziert, die speziell für dieses Gen entwickelt wurden. Die Ergebnisse zeigten einen Anstieg der COL3A1-Expression, der während der 7-tägigen Probenentnahme nach der letzten Verabreichung anhielt. Dabei wurden empfindlichere und robustere Ergebnisse beobachtet als bei der Quantifizierung des PIIINP-Proteins im Serum derselben Personen. Nach dem Versuchsaufbau wurde eine Teilvalidierung durchgeführt, bei der Parameter wie Linearität, Variation zwischen und innerhalb des Tests, Einfluss von Geschlecht und Alter, Stabilität der Blutproben bei Lagerung bei 4 °C und Menge der Blutprobe untersucht wurden.