Zeitschrift für Angewandte Pharmazie
Offener Zugang

Abstrakt

Eine vierdimensionale (4D) Stabilität anzeigende analytische Methode zur Optimierung und Potenz-Assay-Vorhersage mittels MS und UV-Peak-Tracking

Blasko A, Tam J, Ahmad IAH, Gunasekera S, Oshchepkova I, Galin, Andrey Vazhentsev A, Tashlitsky V und Adams D

Insgesamt 60 Peaks, die durch erzwungenen Abbau von drei aktiven pharmazeutischen Inhaltsstoffen (APIs) erzeugt wurden, wurden für die Säulenauswahl bei der Entwicklung einer stabilitätsanzeigenden HPLC-UV-Analysemethode unter Verwendung von LC-UV- und LC-MS-Peak-Tracking verwendet. Zwei mobile Phasenzusätze und zwei organische Modifikatoren wurden beim Screening einer Liste sorgfältig ausgewählter Chromatographiesäulen bewertet. Das Säulenscreening wurde genutzt und die beste Säule basierend auf der Gesamtzahl der aufgelösten Peaks, Auflösungen, Peakbreiten und Peakformen ausgewählt. 0,1 % TFA in ACN/Wasser wurde für das anfängliche Screening und die Optimierung des Gradientenprofils verwendet. Drei verschiedene Konzentrationen von TFA in ACN/Wasser wurden ebenfalls bewertet. Die optimale TFA-Konzentration von 0,10 % (8,77 mM) wurde basierend auf der Auflösung kritischer Paare als optimal für die weitere Gradientenoptimierung angesehen. Nach der Auswahl der Säule, der mobilen Phase und des mobilen Phasenmodifikators (TFA) wurde die Optimierung des Gradienten durch eine Kombination aus automatisiertem chemometrischem Peak-Tracking und softwarebasierten Entscheidungen in AutoChrom MS erreicht. Die richtigen Peak-Retentionsgleichungen (d. h. Retentionszeit vs. Verhältnis der mobilen Phase) wurden durch die Verwendung von einstufigen Gradienten mit einem breiten Bereich von % B und anschließender Optimierung in mehrstufigen Gradienten generiert. Es wurde festgestellt, dass Extrapolation unter Verwendung quadratischer Retentionsmodelle zu großen Fehlern bei der Vorhersage der Retentionszeit (tR) führen kann, insbesondere bei schlecht zurückgehaltenen Komponenten. Wir stellen die Herausforderungen bei der Auflösung der kritischen Auflösungspaare dar, einschließlich derjenigen mit demselben m/z, die Überschätzung und die Vorhersagefehler der Software und warum das Peak-Modell (d. h. Genauigkeit der Vorhersage gegenüber der experimentellen) an den Extremen des Gradienten versagt. Mithilfe dieses Ansatzes konnten wir eine geeignete stabilitätsanzeigende chromatographische Methode für eine äußerst anspruchsvolle Probe entwickeln, die aus drei aktiven pharmazeutischen Inhaltsstoffen (APIs) und verwandten Abbauprodukten mit einem breiten Bereich an Hydrophobie besteht. Die APIs waren hauseigene Verbindungen, ihre Identität wird in diesem Dokument verschwiegen und ist für den Zweck der Studie nicht relevant. Es gab gute Übereinstimmungen zwischen den vorhergesagten und den experimentellen Retentionszeiten der verfolgten Peaks. Das Peak-Modell wurde ausschließlich für die Generierung einer Test-/Potenzmethode unter Verwendung des Rechentools verwendet.