Immunomforschung
Offener Zugang

Abstrakt

Eine neue Strategie zur Identifizierung von Antigenen, die von bovinen MHC Klasse I restringierten zytotoxischen T-Zellen bei einer Protozoeninfektion erkannt werden, unter Verwendung der umgekehrten Vakzinologie

Simon P. Graham, Yoshikazu Honda, Roger Pellé, Duncan M. Mwangi, E. Jane Glew, Etienne P. de Villiers, Trushar Shah, Richard Bishop, Pierre van der Bruggen, Vishvanath Nene und Evans LN Taracha

Hintergrund: Es wurde bereits gezeigt, dass Immunität gegen den bovinen Protozoenparasiten Theileria parva durch die Lyse parasiteninfizierter Zellen durch MHC-Klasse-I-restringierte CD8+-zytotoxische T-Lymphozyten vermittelt wird. Es wird angenommen, dass die Identifizierung von CTL-Ziel-Schizontantigenen die Entwicklung eines Untereinheitenimpfstoffs unterstützen wird. Wir haben die Verfügbarkeit der vollständigen Genomsequenzdaten und bioinformatischer Tools genutzt, um Gene zu identifizieren, die sezernierte oder membranverankerte Proteine ​​kodieren, die von den MHC-Klasse-I-Molekülen infizierter Zellen verarbeitet und CTL präsentiert werden können. Ergebnisse: Von den 986 vorhergesagten offenen Leserahmen (ORFs), die durch Chromosom 1 des T. parva-Genoms kodiert werden, wurden 55 aufgrund des Vorhandenseins eines Signalpeptids und/oder einer Transmembranhelixdomäne ausgewählt. Sechsunddreißig ausgewählte ORFs wurden erfolgreich in einen eukaryotischen Expressionsvektor geklont, vorübergehend in immortalisierte Rinderhautfibroblasten transfiziert und in vitro mit T. parva-spezifischen CTL gescreent. Die Erkennung von Genprodukten durch CTL wurde mit einem IFN-γ ELISpot-Test bewertet. Ein 525 Basenpaare langer ORF, der ein 174 Aminosäuren umfassendes Protein mit der Bezeichnung Tp2 kodiert, wurde durch T. parva-spezifische CTL von 4 Tieren identifiziert. Diese CTL erkannten und lysierten Tp2-transfizierte Hautfibroblasten und erkannten 4 verschiedene Epitope. Bezeichnenderweise wurden Tp2-spezifische CD8+ T-Zell-Reaktionen während der schützenden Immunantwort gegen Sporozoiten-Herausforderung beobachtet. Schlussfolgerung: Die Identifizierung eines Antigens, das mehrere CTL-Epitope enthält, und seine offensichtliche Immundominanz während einer schützenden Antiparasiten-Reaktion machen Tp2 zu einem attraktiven Kandidaten für die Bewertung seines Impfstoffpotenzials.