Zeitschrift für Zellwissenschaft und Therapie
Offener Zugang

Abstrakt

Eine einfache Methode zur Isolierung, Vermehrung, Charakterisierung und Differenzierung von aus dem Knochenmark adulter Mäuse gewonnenen multipotenten mesenchymalen Stammzellen

Jitendra Kumar Chaudhary and Pramod C Rath

Mesenchymale Stammzellen (MSCs) sind spindelförmig, anhaftend, klonogen, nicht phagozytisch, fibroblastisch und von Natur aus multipotent mit der inhärenten Fähigkeit zur Selbsterneuerung und Proliferation. Knochenmark ist die reichhaltigste Quelle von MSCs zur Erforschung der zugrundeliegenden Prozesse der Proliferation, Selbsterneuerung und Differenzierung in mehrere Zelllinien. Es gab mehrere Studien zur Verbesserung der Methode zur Isolierung, Vermehrung, Charakterisierung und Differenzierung mesenchymaler Stammzellen aus dem Knochenmark von Mäusen, aber keine davon wurde allgemein akzeptiert. Da es keine allgemein akzeptierte Methode zur Kultivierung von MSCs gibt, werden in dieser Richtung weiterhin Anstrengungen unternommen. Hier berichten wir über eine einfache Methode mit einigen subtilen Modifikationen, die darauf abzielt, die allgemeine Methode zur Isolierung, Kultivierung, Vermehrung und Differenzierung von MSCs in vitro zu verbessern. Nach diesem Protokoll haben wir MSCs mit typischer spindelförmiger Morphologie isoliert, wie durch Rasterelektronenmikroskopie gezeigt. Diese Zellen zeigten auch die Expression von MSC-spezifischen Markern, CD29 (98,94 % ± 0,67 %), CD44 (84,27 % ± 7,77 %), Sca-1 (92,70 % ± 3,81 %) mit vernachlässigbarer Expression von HSC-spezifischen Markern wie CD45 (0,40 % ± 0,10 %), CD34 (0,15 % ± 0,05 %) und CD11b (0,45 % ± 0,15 %). Es wurde auch festgestellt, dass sich MSCs in mesodermale Linien wie Adipozyten, Osteozyten und Chondrozyten sowie ektodermale neuronenähnliche Zellen differenzieren. Darüber hinaus zeigten MSCs eine differenzielle basale Expression von pluripotenzassoziierten Transkriptionsfaktoren wie Oct4, Nanog, Sox2 und Myc. Basierend auf den oben genannten Erkenntnissen schlagen wir ein einfaches Protokoll vor, das zur Isolierung, Kultivierung, Vermehrung und Charakterisierung multipotenter MSCs aus dem Knochenmark von Mäusen für experimentelle und Anwendungszwecke verwendet werden kann.