Fortgeschrittene Techniken in Biologie und Medizin
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Abstrakt

Analyse des Polymorphismus des menschlichen Androgenrezeptors mithilfe der Fluorescent Loop-Hybrid Mobility Shift-Technik

Tomokazu Ishikawa, Shoichi Matsukuma, Mitsuyo Yoshihara, Tatsuo Kurosawa und Yohei Miyagi

Zur Analyse der polymorphen Stellen in Exon 1 des menschlichen Androgenrezeptor-Gens wurde eine Fluoreszenz-Loop-Hybrid-Mobility-Shift-Technik (LH-MS) eingeführt. Es wurde angenommen, dass (CAG)17-31- oder (CTG)17-31-Loops nach Hybridisierung mit Reverse- bzw. Forward-LH-Sonden aus den Sense- bzw. Antisense-Strängen der PCR-Produkte herausragen. Bei der Analyse einer Reihe männlicher DNA mit Cy5-markierten LH-Sonden wurde eine einzigartige lineare Korrelation zwischen den CAG-Wiederholungslängen und den fluoreszierenden LH-Bandenpositionen auf Polyacrylamidgelen festgestellt. Diese linear verschobenen Bandenmuster wurden verwendet, um LH-Leitergrößenmarker der CAG-Wiederholungslängen zusammenzustellen. Die Analyse weiblicher DNA ergab, dass 87 % der Frauen heterozygot für CAG-Wiederholungspolymorphismen sind, was für die Klonalitätsanalyse von Tumoren bei weiblichen Krebspatienten aufschlussreich sein könnte. Als Machbarkeitsnachweis wurde DNA heterozygoter weiblicher kolorektaler Tumore mithilfe der Fluoreszenz-LH-MS-Technik untersucht. Dabei wurde der Verlust eines Allels nach der Behandlung mit dem methylierungsempfindlichen Restriktionsenzym HpaII deutlich nachgewiesen.