Transkriptomik: Offener Zugang
Offener Zugang

Abstrakt

Artikulation von Escherichia coli und Reinigung von SAK-gebundenem humanem Interferon Alpha

Raj Gaikwad

Eine Methode zur verbesserten Rückfaltung und Filtration von aus E. coli gewonnenem humanem Interferon-α (rhIFN α2b) aus Integrationskörpern als Staphylokinase (SAK)-Hybridisierungsprotein wird beschrieben. Ein solches Hybridisierungsprotein benötigte keine Ergänzung von Sondercodons zur Expression und erwies sich bei 37 °C als stabil. Die idealen Bedingungen der Rückfaltung umfassten die Verwendung eines sanften denaturierenden Operators ohne die Notwendigkeit anderer Agenten, um eine Agglomeration zu verhindern. Das SAKrhIFN α2b-Hybridisierungsprotein wurde mithilfe von zwei Reinigungsstufen erfolgreich gefiltert und mithilfe von Enterokinase in zwei Teile, nämlich SAK und IFN, getrennt. Beide Proteine ​​erwiesen sich als biologisch aktiv, was auf die korrekte Kollation der beiden Hybridisierungspartner schließen lässt. Das isolierte IFN zeigte eine vergleichbare Haltbarkeitszeit auf RP-HPLC wie das bakteriell bestimmte unmarkierte gefilterte IFN sowie eine vergleichbare subatomare Ladung auf dem Agilent 2100 Bioanalyzer, was die korrekte Verarbeitung des IFN nach Enterokinasespaltung zeigt. Die Expressionsniveaus von SAK-IFN waren unter vergleichbaren experimentellen Bedingungen doppelt so hoch wie bei unmarkiertem IFN.Interferone (IFNs) sind natürliche zellmarkierende Proteine, die von den Zellen des Immunsystems der meisten Wirbeltiere als Reaktion auf Herausforderungen wie Viren, Parasiten und Tumorzellen produziert werden. Sie gehören zur großen Klasse der Glykoproteine, die von einer Vielzahl von Zellen aufgrund der Präsenz doppelsträngiger RNA, einem Schlüsselmarker einer Virusinfektion, produziert werden. Nachdem das klinische Potenzial von IFN erkannt wurde, genehmigte die FDA die Medikamente, insbesondere rhIFNα2a (Roferon A) und IFNα2b (Intron A), zur Behandlung von bösartigen Tumoren und Viruserkrankungen. Interferontherapie wird (in Kombination mit Chemotherapie und Bestrahlung) zur Behandlung einiger Krankheiten, AIDS-bedingtem Kaposi-Sarkom und chronischer Hepatitis B und C eingesetzt (Remington, 1995).