Fortgeschrittene Techniken in Biologie und Medizin
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Abstrakt

Biolumineszenzmethoden zur schnellen Bestimmung der spezifischen Aktivität von lyophilisiertem BCG-Impfstoff

Natalia N. Ugarova und Galina Yu Lomakina

Die spezifische Aktivität eines lyophilisierten BCG-Impfstoffs (CFU/mg Biomasse) ist eine der wichtigsten Eigenschaften dieses Produkts. Die klassische mikrobiologische Methode zur Bestimmung der Aktivität des BCG-Impfstoffs ist sehr zeitaufwändig und liefert erst nach 4–5 Wochen Ergebnisse. Die biolumineszierende Bestimmung der spezifischen Aktivität auf Grundlage des Glühwürmchen-Luciferase-Luciferin-Systems ermöglicht es, die Dauer des Tests erheblich zu verkürzen. Seit den 1970er Jahren wird die ATP-Methode sukzessive zur Untersuchung der spezifischen Aktivität verschiedener BCG-Stämme eingesetzt. Im Jahr 2008 wurde die biolumineszierende ATP-Methode zur Analyse lyophilisierter BCG-Impfstoffpräparate vorgeschlagen und evaluiert. Die Dauer der Analyse verkürzte sich von mehreren Wochen auf 2 Tage. Diese Methode wurde in der internationalen Gemeinschaftsstudie zur Bewertung und Festlegung von WHO-Referenzreagenzien für BCG-Impfstoffe verwendet. Im Jahr 2016 wurde ein neues Protokoll veröffentlicht, das die Verwendung der ATP-Methode zur Bestimmung der spezifischen Aktivität der lyophilisierten BCG-Impfstoffe beschreibt. Die Dauer des Tests verkürzte sich auf 2 Stunden. Es zeigte sich eine gute Korrelation zwischen dem CFU-Wert und dem intrazellulären ATP-Gehalt.