Mykobakterielle Erkrankungen
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Abstrakt

Klonierung und Sequenzierung der Tuberkulose-Gene Rv0577 und Rv3846 für einen DNA-Impfstoff

Mussarat Qasim1, Asifa Hameed2*, Mirza Imran Shehzad1

Tuberkulose (TB), verursacht durch Mycobacterium tuberculosis (M. tb), ist weltweit das größte Gesundheitsproblem. Es handelt sich um eine ansteckende, weit verbreitete Krankheit in Entwicklungsländern, darunter Pakistan. Armut in Entwicklungsländern macht diese Krankheit zu einem akuten Gesundheitsproblem. Fast ein Drittel der Weltbevölkerung ist von TB betroffen. Pakistan steht an fünfter Stelle der Länder mit der höchsten Tuberkulose-Infektionsrate. Von 100.000 Menschen sind in Pakistan etwa 280 mit dieser Krankheit infiziert. Eine Impfung ist die Methode, um dem Ausbruch der Krankheit vorzubeugen. Bacillus Calmette-Guerin (BCG) ist der einzige zugelassene Impfstoff gegen TB weltweit. Die durch diesen Impfstoff entwickelte Schutzimmunität ist jedoch in verschiedenen Teilen der Welt unterschiedlich. Daher besteht Bedarf an der Entwicklung neuer DNA-basierter TB-Impfstoffe auf Grundlage von Informationen, die durch die Sequenzierung des gesamten Genoms von Mycobacterium tuberculosis gewonnen wurden , da DNA-Impfstoffe sowohl humorale als auch zelluläre Immunreaktionen hervorrufen können. In den vorliegenden Studien haben wir zwei Mycobacterium tuberculosis -Gene, Rv0577 und Rv3846, für die Entwicklung eines DNA-Impfstoffs ausgewählt. Diese Gene wurden durch PCR amplifiziert, durch Restriktionsverdau bestätigt, in den pTZ57R/T-Vektor ligiert und in DH5α-Zellen transformiert. Die Klone wurden durch Restriktionsverdau und Sequenzanalyse bestätigt. In Zukunft können diese Klone zum Subklonieren in Säugetierexpressionsvektoren verwendet und als DNA-Impfstoffe in Mäusemodellen getestet werden.