Zeitschrift für klinische und experimentelle Ophthalmologie
Offener Zugang

Abstrakt

Kontrollierbare Urokinase-Genexpression in Trabekelwerkzellen

Mei Tsuda, Shiho Kaneko, Akira Ando, ​​Tetsuya Nishimura, Emiko Okuda-Ashitaka, Seiji Ito, Makoto Taomoto, Miyo Matsumura und Kanji Takahashi

Zweck: Glaukom ist eine Form progressiver Optikusneuropathie, die schließlich aufgrund erhöhten Augeninnendrucks (IOD) zur Erblindung führt. Die Ansammlung von extrazellulärer Matrix im Trabekelwerk (TM) und den juxtakanalikulären Bindegeweben, die einen Kammerwasserabflussweg bilden, kann eine Hauptursache für erhöhten IOD sein, sodass das fibrinolytische System möglicherweise an der Regulierung des IOD beteiligt ist. Wir untersuchten die Möglichkeit eines kontrollierbaren Gentransfers des Urokinase-Plasminogenaktivators (uPA) in TM-Zellen.
Methoden: TM-Zellen wurden frisch aus Schweineaugen und menschlichen TM-Zellen, die bei Trabekulektomien gewonnen wurden, isoliert und kultiviert. Aus menschlichen TM-Zellen wurde Gesamt-RNA extrahiert und in cDNA rücktranskribiert. Anschließend wurde eine rücktranskribierte Polymerase-Kettenreaktion (RT-PCR) durchgeführt, um die Genexpression von uPA festzustellen. Die cDNA von humanem uPA wurde in einen Expressionsvektor (pEYFP-N1-Vektor) und einen kontrollierbaren Expressionsvektor (TRE-Tight-Vektor) subkloniert, dann wurde jeder Vektor unabhängig in kultivierte porcine TM-Zellen transfiziert. Zur Aktivierung der Vektoren pTet-ON und TRE-Tight wurde dem Kulturmedium Doxycyclin hinzugefügt. Abschließend wurde die Expression von uPA mit einem Enzymimmunoassay (ELISA) untersucht.
Ergebnisse: Die ELISA-Befunde zeigten die Expression von uPA (3,5 ng/ml) im Medium von kultivierten porcinen TM-Zellen, die mithilfe des Vektors pEYFP-N1 mit dem humanen uPA-Gen transfiziert worden waren. Doxycyclin induzierte dosisabhängig humanes uPA in den Vektoren pTet-On und TRE-Tight mit mit dem humanen uPA-Gen kotransfizierten TM-Zellen.
Schlussfolgerungen: Ein kontrollierter Gentransfer von uPA, das die extrazelluläre Matrix im juxta-kanalikulären Bindegewebe abbauen kann, in TM-Zellen wurde mithilfe eines Tet-On-Systems erreicht. Die vorliegende Methode könnte als neuartige Therapie für Glaukom nützlich sein.