Zeitschrift für Chromatographie und Trenntechniken
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Abstrakt

Entwicklung einer ultrahochleistungsfähigen flüssigkeitschromatographischen Diodenarray-Methode zur Quantifizierung von Voriconazol im menschlichen Plasma

Yousra elmazahy*, Ahmed Farag, Lobna shalaby,Mohamed Nagy,

Es wurde eine schnelle und selektive Umkehrphasen-Flüssigkeitschromatographie-Diodenarray-Methode (DAD) entwickelt und validiert, um Voriconazol in menschlichem Plasma zu bestimmen. Dank des hohen Durchsatzes und der Empfindlichkeit der Ultrahochleistungsflüssigkeitschromatographie (UHPLC) betrug die Laufzeit nur 7,5 Minuten und es wurden keine Puffer verwendet. 200 μl Serum und 200 μl interner Standard Fluconazol wurden hinzugefügt. Nach einfacher Proteinfällung mit 400 μl Methanol wurden 10 μl des klaren Überstands auf einer Agilent Zorbax Eclipse Plus® C18-Säule (50 x 2,1 mm, 1,8 μm) getrennt. Die Säulentemperatur wurde bei 40 °C gehalten. Die Flussrate betrug 0,4 ml/min unter Verwendung einer Gradientelution von Methanol und Wasser. Die Retentionszeiten von Fluconazol und Voriconazol betrugen 4,2 bzw. 6,2 Minuten. Die Detektion wurde mit einem Diodenarraydetektor durchgeführt, der auf eine Wellenlänge von 261 nm eingestellt war. Die Methode wurde gemäß FDA Guidance for Industry, Bioanalytical Method Validation optimiert und validiert. Die Eignung des Systems in Bezug auf theoretische Platten, Auflösung, Tailing und Injektionspräzision in Bezug auf Retentionszeit und -fläche wurde durchgeführt, um die Eignung und Wirksamkeit des chromatographischen Systems gemäß ICH-Richtlinien sicherzustellen. Die entwickelte Methode lieferte hervorragende Ergebnisse hinsichtlich Wiederfindung, Genauigkeit, Präzision, Selektivität, Stabilität und Reproduzierbarkeit. Die Kalibrierungskurve war über einen Bereich von 0,2–12 μg/ml linear mit einem Korrelationskoeffizienten von 0,9997c und deckte den therapeutischen Bereich für eine angemessene Arzneimittelüberwachung ausreichend ab. Die Nachweis- und Quantifizierungsgrenze betrugen 0,2 μg/ml bzw. 0,5 μg/ml. Die Intra-Day-Genauigkeits- und Präzisions-Variablen lagen bei 91,2–120 % bzw. 0,8–6,8 %, und die Inter-Day-Genauigkeit und Präzision lagen bei 92,6–115 % bzw. 2,5–7,5 %. Die absolute Wiederfindung betrug für Voriconazol 100 % ± 15 %.