Zeitschrift für Chromatographie und Trenntechniken
Offener Zugang
ISSN: 2157-7064
ISSN: 2157-7064
Momal Alexe*, Dhesse Quentin, Goderniaux Nicolas, Colsoul Marie-Lise, Closset Mélanie
Einleitung: Die Messung der Ausscheidung von Kortikosteroiden und ihren Metaboliten im Urin wird zur Beurteilung der Nebennierenfunktion beim Cushing-Syndrom oder bei Nebennierenkrebs verwendet. Zur Diagnose des Cushing-Syndroms wird die Quantifizierung des freien Cortisols im Urin (UFC) empfohlen.
Ziel: Entwicklung einer einfachen, reproduzierbaren und spezifischen Testtechnik zur Quantifizierung von UFC mittels Hochleistungsflüssigchromatographie (UHPLC)
Methoden: Wir haben eine Methode entwickelt, die auf einem Ultra-High Performance Liquid Chromatography (UHPLC)-Test basiert, der mit einem einzelnen Quadrupol-Massendetektor (QDa) gekoppelt ist. Die Proben wurden mittels unterstützter Flüssigextraktion (SLE) extrahiert. Die Urinproben wurden mit 1 % Ameisensäure und dem internen Standard vorbehandelt. Cortisol wurde mit Dichlormethan eluiert. Das Lösungsmittel wurde verdampft und die Proben mit Wasser rekonstituiert. Die Verbindungen wurden auf einer HSS T3-Säule mit Gradientelution (Wasser, 0,1 % Ameisensäure und Acetonitril) getrennt. Das Injektionsvolumen betrug 1 µl und die Flussrate 0,6 ml/min. Wir haben die Methode hinsichtlich Linearität, Präzision, Wiederfindung, Genauigkeit und Nachweis- und Quantifizierungsgrenzen untersucht.
Ergebnisse: Der lineare Bereich dieser Methode reichte von 5 μµg/l bis 1000 µg/l bei einem Determinationskoeffizienten von 0,99. Die Präzision wurde anhand der relativen Standardabweichung (RSD) für Intra-Assay und Inter-Assay bewertet und lag für beide unter 9 %. Die Methode zeigte eine angemessene Cortisol-Rückgewinnung (>91 %). Die Nachweisgrenze betrug 0,28 µg/l und die Quantifizierungsgrenze 0,75 µg/l.
Schlussfolgerung: Die UFC UHPLC-QDa-Nachweismethode mit einem SLE-Schritt zeigt angemessene Leistungen. Sie ist einfach, reproduzierbar und für den routinemäßigen Einsatz im Labor geeignet.