Zeitschrift für Chromatographie und Trenntechniken
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Abstrakt

Entwicklung und Validierung einer Hochleistungsflüssigkeitschromatographie-Tandem-Massenspektrometrie-Methode (HPLC-MS/MS) zur Bestimmung von Tenofovir in kleinen Mengen menschlichen Plasmas

Mulubwa M, Rheeders M, Du Plessis L, Grobler A und Viljoen M

Die Bestimmung der Plasmakonzentrationen von Tenofovir (TFV) in kleinen Plasmavolumina und in einem kurzen Zeitraum ist im klinischen Umfeld äußerst wünschenswert. Die HPLC -MS/MS-Methode wurde für die Bestimmung von TFV entwickelt und validiert. Plasmaprobenvolumina von 10 μl wurden durch Proteinfällung extrahiert. Cimetidin, das als interner Standard (ISTD) verwendet wurde, und TFV wurden auf einer C18-Umkehrphasensäule (Phenomenex Kinetex TM 30 mm × 2,1 mm, 2,6 μm) mit Vorsäule getrennt. Die Gradientenmobilphase bestand aus 10 mmol/l Ammoniumacetat in Wasser und Acetonitril/Methanol (50:50, v/v). Die Retentionszeiten für TFV und ISTD betrugen 0,27 bzw. 0,90 Minuten bei einer Laufzeit von 2 Minuten. Der Übergang des Ausgangs- zum Produktion von TFV (m/z 288,072→176,038) und ISTD (m/z 253,13→158,987) wurden im positiven Ionisierungsmodus überwacht. Die Kalibrierungskurven waren über einen TFV-Konzentrationsbereich von 12,5–600 ng/ml linear (durchschnittliches r2, 0,9958). Die mittlere Wiederfindungsrate betrug 96,9 %. Genauigkeit, Inter- und Intraassay von drei Qualitätskontrollen und untere Bestimmungsgrenze (12,5 ng/ml) lagen innerhalb der akzeptablen Grenze von <15 % relativer Standardfehler. TFV war unter den untersuchten Bedingungen stabil und es wurden weder Matrixeffekte noch signifikante Verschleppungen beobachtet. Es wurde eine eindeutige, zuverlässige und robuste Methode zur Bestimmung von TFV in einem kleinen Volumen (10 μl) menschlichen Plasmas entwickelt, validiert und integriert, um die Plasma-TFV-Werte bei 30 HIV-infizierten Frauen unter antiretroviraler Behandlung zu bestimmen.