Zeitschrift für Proteomik und Bioinformatik
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Abstrakt

Epac-induzierte Veränderungen im Proteom menschlicher SH-SY5Y-Neuroblastomzellen

Sogar Birkeland, Gyrid Nygaard, Eystein Oveland, Olav Mjaavatten, Marie Ljones, Stein Ove Doskeland, Camilla Krakstad und Frode Selheim

Das bisherige Proteom der humanen Neuroblastomzelllinie SH-SY5Y besteht aus 1029 einzigartigen Proteinen. Mittels subzellulärer Fraktionierung, SDS PAGE und nanoLC-Q-TOF-MS/MS konnten wir das Proteom um weitere 72,2% vergrößern, so dass nun 3707 einzigartige Proteine ​​vorliegen.

Es ist bekannt, dass das Stadium der Differenzierung von Neuroblastomtumorzellen die Prognose der Patienten beeinflusst. Ein hohes Differenzierungsstadium korreliert mit einer günstigen Prognose. Um die Auswirkungen von cAMP bei der Differenzierung von SH-SY5Y-Neuroblastomen aufzuklären, verwendeten wir selektive cAMP-Analoga zur Aktivierung von Epac und PKA.

Wir fanden heraus, dass die Aktivierung von Epac die Polymerisation von Aktin und Tubulin sowie das Wachstum von Neuriten induzierte, während die Aktivierung von PKA dies nicht tat. Die Auswirkungen der Epac-Stimulation wurden durch Knockdown von Epac1 mit ShRNA aufgehoben.

Mithilfe stabiler Isotopenmarkierung mit Aminosäuren in Zellkulturen (SILAC) und Massenspektrometrie wurden die Langzeiteffekte der Epac-Aktivierung auf das SH-SY5Y-Proteom aufgezeigt. Wir fanden 101 hochregulierte und 74 herunterregulierte exprimierte Proteine. Hochregulierte Proteine ​​waren im Allgemeinen mit der neuronalen Zelldifferenzierung und -adhäsion verbunden, während herunterregulierte Proteine ​​typischerweise an der RNA-Verarbeitung beteiligt waren. Wir schlussfolgern, dass die cAMP-induzierte morphologische und biochemische neuronale Differenzierung menschlicher Neuroblastom-SH-SY5Y-Zellen durch Epac vermittelt wird.