Zeitschrift für Chromatographie und Trenntechniken
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Abstrakt

Vollständige Validierung einer hochauflösenden ICP-MS-Bioanalysemethode für Eisen in menschlichem Plasma mit K2EDTA

Monica Whitmire, Anastasia Osredkar, Jennifer Ammerman, Jeff Biss, Chaoyang Huang, Tracy Marshall, Krista Ehringer und Patricia de Lisio

Zweck: Validierung einer bioanalytischen Methode der induktiv gekoppelten Plasma-Massenspektrometrie (ICP-MS) zur Quantifizierung von Eisen in menschlichem Plasma mit K2EDTA (Matrix). Diese Methode wurde anhand typischer bioanalytischer Validierungsparameter validiert. Materialien und Methoden: Eisenreferenzstandards und Germanium-interner Standard (IS) stammten von Ultra Scientific. Reagenzwasser hatte einen spezifischen Widerstand von ?18 M?cm. Salpetersäure und Salzsäure waren ultrarein. Die Blankomatrix wurde von BioReclamation bezogen. Die Linearität wurde anhand von acht Standards beurteilt, die in einer Proxy-Matrix über einen Bereich hergestellt wurden, der 0,5-20 ?g Eisen/ml Matrix zu Beginn und Ende jedes Laufs entsprach. Qualitätskontrollproben (QC) wurden durch Anreicherung der Matrix mit 0,5, 1,5, 10, 15 und 100 ?g/ml hergestellt. In jeden Lauf wurden ein Blank mit IS und ein doppelter Blank einbezogen. Die Selektivität wurde anhand von sechs verschiedenen Chargen von Matrix bewertet, die mit IS und Analyt auf LLOQ-Niveau angereichert waren. Zur Analyse vorbereiteter Proben wurde ein Thermo-Finnigan ELEMENT2 High Resolution ICP-MS verwendet. Ergebnisse: Eignung des Systems, Selektivität, Verschleppung und Robustheit erfüllten alle die Akzeptanzkriterien. Linearität wurde durchgängig nachgewiesen. Die Wiederfindungen für alle Kalibrierungsstandards und Qualitätskontrollen lagen innerhalb der Akzeptanzkriterien. Einfrieren/Auftauen wurde für 4 Zyklen nachgewiesen. Die Reproduzierbarkeit auf der Werkbank war nach 53 Stunden Lagerung bei Raumtemperatur erfolgreich. Die Reproduzierbarkeit der Reinjektion war nach 96 Stunden Lagerung bei Raumtemperatur erfolgreich. Die Extraktstabilität war nach 190 Stunden Lagerung bei Raumtemperatur erfolgreich. Die Stabilität der IS-Lösung war nach 29 Tagen Lagerung bei Raumtemperatur erfolgreich. Die Stabilität des Kalibrierungsstandards war nach 8 Tagen Lagerung bei Raumtemperatur erfolgreich. Die Stabilität der Analyt-Stammlösung war nach 29 Tagen Lagerung bei Raumtemperatur erfolgreich. Die Langzeitlagerungsstabilität war nach 31 Tagen bei 2 bis 8 °C, 31 Tagen bei -15 bis -25 °C und 30 Tagen bei -70 bis -90 °C erfolgreich. Schlussfolgerung: Diese bioanalytische ICP-MS-Methode wurde erfolgreich für die Quantifizierung von Eisen in menschlichem Plasma mit K2EDTA validiert.