Zeitschrift für antivirale und antiretrovirale Medikamente
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Abstrakt

Gentherapie mit einem sekretierten variablen Einzelkettenfragment, das auf CCR5 abzielt, um die HIV-Infektion zu hemmen

Alexander Falkenhagen, Masoud Ameli, Sabah Asad, Stanley E Read und Sadhna Joshi

Die Interaktion von R5 HIV mit zellulärem CCR5 ist für den Eintritt in Wirtszellen zwingend erforderlich. Der humanisierte monoklonale Antikörper PRO 140 maskiert CCR5 auf der Zelloberfläche und blockiert wirksam die R5 HIV-Infektion. Während wöchentliche Verabreichungen von PRO 140 die Viruslast bei Patienten nachweislich drastisch reduzieren, sind häufige Injektionen gereinigter Antikörper weder praktikabel noch kosteneffektiv. Die Entwicklung genmodifizierter Zellen oder Gewebe zur Sekretion therapeutischer Proteine ​​an Stellen der Virusreplikation kann die fortgesetzte Verabreichung von Medikamenten vorteilhaft ersetzen. Wir haben ein Gen entwickelt, das ein sezerniertes, einkettiges variables Fragment von PRO 140, sscFvPRO140, kodiert, und haben einen lentiviralen Vektor für seine Abgabe und Expression verwendet. Das sscFvPRO140 wurde wirksam aus genmodifizierten Zellen sezerniert, blieb im Kulturüberstand bei 37 °C stabil und band spezifisch an CCR5-exprimierende Zellen. Um die Hemmung der HIV-Infektion zu beurteilen, wurden Einzelrunden-Infektionstests durchgeführt. sscFvPRO140 reduzierte den R5-HIV-Eintritt in unveränderte Zielzellen, allerdings mit geringerer Wirksamkeit im Vergleich zu dem, was für den ursprünglichen monoklonalen Antikörper berichtet wurde. Der Eintritt von X4-HIV, das CXCR4 als Co-Rezeptor verwendet, blieb unverändert. Darüber hinaus wurde der Viruseintritt erheblich reduziert, wenn genmodifizierte HIV-Zielzellen, die sscFvPRO140 exprimieren, infiziert wurden. Eine Gentherapie mit intrazellulär aktiven Molekülen wie Ribozymen oder Zinkfingernukleasen bietet nur genmodifizierten Zielzellen Schutz. Im Gegensatz dazu hat die vorgeschlagene Gentherapiestrategie auf der Grundlage sezernierter Anti-HIV-Proteine ​​das Potenzial, sowohl genmodifizierte als auch unveränderte HIV-Zielzellpopulationen zu schützen.