Zeitschrift für antivirale und antiretrovirale Medikamente
Offener Zugang

Abstrakt

Infektiöse Vollklone des Calibrachoa Mottle Virus (CbMV)

Anju Gulati-Sakhuja und Hsing-Yeh Liu

Vollständige cDNA-Klone, die aus genomischer RNA (gRNA) und subgenomischer RNA (sgRNAs) des Calibrachoa-Mottle-Virus (CbMV) stammen, wurden unter der Kontrolle des T7-RNA-Promoters konstruiert und in das Plasmid pUC-18 ligiert. Die gekappten und ungekappten In-vitro-Transkripte, die aus dem vollständigen genomischen cDNA-Klon pUC-CbMV-FL synthetisiert wurden, erzeugten innerhalb von 10 bis 15 Tagen nach der Inokulation chlorotische lokale Läsionen auf mechanisch inokuliertem Chenopodium quinoa. Die aus inokulierten symptomatischen Blättern gewonnenen Nachkommenvirionen hatten die gleichen morphologischen Eigenschaften wie die Elternvirionen. Diese Virionen reagierten auch im Doppelantikörper-Sandwich-Enzyme-linked Immunosorbent Assay (DAS-ELISA) positiv mit CbMV-Antiserum und das virale Hüllprotein wurde durch Western Blotting nachgewiesen. Das Vorhandensein von fünf offenen Leserahmen (ORFs) im Genom von CbMV und die Synthese der entsprechenden Proteine ​​durch gRNA und sgRNAs wurden durch Northern Blotting und In-vitro-Translation bestätigt. Der Transkriptionsstartpunkt von drei sgRNAs von CbMV wurde ebenfalls bestimmt. Die erfolgreiche Konstruktion eines vollständigen infektiösen cDNA-Klons von CbMV ermöglicht die Entwicklung molekularer Werkzeuge, mit denen die Genfunktionen dieses Virus verstanden werden können.