Zeitschrift für Angewandte Pharmazie
Offener Zugang

Abstrakt

Isolierung, Kinetik und in vitro-Antileukämische Aktivität von Capsicum annum-Lglutaminase

Mohannad Idress, Mohammed Salim, Asia El-Hassan

Ziel dieser Studie ist es, das Entwicklungspotenzial von natürlich vorkommender, aus grünen Chilis isolierter L-Glutaminase als Antileukämikum zu erkunden, das im Gegensatz zu anderen nichtselektiven Chemotherapeutika gezielt den Stoffwechsel von Krebszellen angreift. Dies geschah durch Bestimmung der spezifischen Aktivität und der optimalen Bedingungen für L-Glutaminase-Aktivität, gefolgt von partieller Reinigung und einem In-vitro-Zytotoxizitätstest. Die Aktivität der L-Glutaminase wurde im wässrigen Fruchtextrakt mit der Nesslerisierungsmethode gemessen, nach Homogenisierung in flüssigem Stickstoff und Extraktion mit 0,05 M Natriumboratpuffer (pH 8,5). Die Ergebnisse zeigten, dass die L-Glutaminase-Aktivität pro Milligramm Gesamtprotein 18,7 U/mg betrug. Es wurden die optimalen Bedingungen für die katalytische Aktivität von roher, aus Chilifrüchten extrahierter L-Glutaminase untersucht. Die Ergebnisse zeigten, dass die maximale Aktivität der L-Glutaminase erreicht wurde, wenn das Enzym 30 Minuten lang bei 37°C in Gegenwart einer phosphatgepufferten Kochsalzlösung mit einem pH-Wert von 7,2 mit 250 mM L-Glutamin inkubiert wurde. Die Maximalgeschwindigkeit (Vmax) und Affinitätskonstante (Km) von L-Glutaminase betrugen 14,1 mM bzw. 90,2 mM. Rohe L-Glutaminase wurde durch Aussalzen mit sieben verschiedenen Ammoniumsulfatkonzentrationen von 20 % bis 80 % Sättigung gereinigt. Die spezifische Aktivität der gereinigten L-Glutaminase stieg beim Aussalzen in einer 50 %igen Ammoniumsulfatlösung von 18,7 auf 98,5 U/mg. Dieses Ergebnis weist auf die hohe Effizienz der Ammoniumsulfatfällung als Reinigungsmethode hin. Die antileukämische Wirkung wurde durch Vergleich der Zytotoxizität von L-Glutaminase mit Doxorubicin und einer Kombination dieser beiden gegenüber der THP-1-Zelllinie mittels MTT-Test beurteilt. Die Ergebnisse zeigten eine signifikante Antikrebsaktivität mit einer Hemmung von 72,75 % bei der Kombination des Enzyms mit Doxorubicin im Vergleich zum Enzym allein (60,28 %). Diese Erkenntnisse führten zu der Schlussfolgerung, dass L-Glutaminase aus grünen Chilis aufgrund ihres hohen Gehalts in Chilis, ihrer einfachen Reinigung und ihrer erheblichen Zytotoxizität gegenüber menschlichen monozytischen Leukämiezellen als Mittel gegen Leukämie entwickelt werden könnte.