Immunomforschung
Offener Zugang

Abstrakt

Mechanismus der geringen Endotoxinausbeute durch eine Lösung, die einen Chelatbildner und ein Detergenz enthält

Masakazu Tsuchiya

Der Mechanismus der geringen Endotoxin-Rückgewinnung (LER) wurde durch Beobachtung der Veränderung der Partikelgröße und Aktivität von Endotoxin in LER-Lösungen mit Natriumcitrat und Polysorbat 20 untersucht. Interessanterweise dispergierten sich Endotoxinaggregate unter LER-Bedingungen nicht in kleineren Partikeln entsprechend der Abnahme der Aktivität. Diese Beobachtung weicht von früheren Vorhersagen des Mechanismus ab. Endotoxinaggregate wurden dynamisch mittels Lichtstreuung beobachtet und die Aktivität wurde mit dem Limulus-Amöbozyten-Lysat-Test gemessen. Trotz unterschiedlicher verbleibender Aktivität des zugesetzten Endotoxins wurden immer Partikel mit ähnlichen Größen wie Endotoxinaggregate beobachtet. Diese Beobachtung unterscheidet sich von zuvor vorgeschlagenen Mechanismen für LER, bei denen dispergierte Endotoxinaggregate kleiner waren. Basierend auf diesen Erkenntnissen wird ein neuer Mechanismus für LER vorgeschlagen. Gereinigtes Endotoxin bildet in Wasser nicht-lamellare kubische Strukturen und die Endotoxinaggregate werden durch zweiwertige Kationen verstärkt. Wenn gereinigtes Endotoxin zu LER-Lösungen hinzugefügt wird, werden zweiwertige Kationen durch den Chelatbildner aus der äußeren Schicht des Endotoxins entfernt, und der Verlust zweiwertiger Kationen schwächt die äußere Schicht der Endotoxinaggregate. Die Endotoxinaggregatstruktur bleibt bei niedrigerer Temperatur erhalten, aber Endotoxinmoleküle auf der Oberfläche der Endotoxinaggregate werden bei höheren Temperaturen allmählich durch Detergensmoleküle ersetzt. Dieser Ersatz verringert die Oberfläche des Endotoxins und führt zu einer Verringerung der Aktivität der Endotoxinaggregate. Die scheinbare Größe des Aggregats ändert sich nach dem Ersatz nicht.