Heil- und Aromapflanzen
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Abstrakt

Molekulare Züchtung von Solasodinglykosid für Solanum khasianum unter Verwendung des Anti-Solamargine-Einzelketten-Fv-Gens

Waraporn Putalun, Hiroyuki Tanaka, Seiichi Sakamoto und Yukihiro Shoyama

Ein rekombinanter Einzelkettenfragmentvariabler (scFv)-Antikörper wurde aus Hybridomzelllinien konstruiert, die einen anti-Solamargine (As) monoklonalen Antikörper (MAb) exprimieren. Die Eigenschaften des As-scFv-Proteins, das sowohl in rekombinantem Escherichia coli als auch in der Haarwurzel exprimiert wird, waren nahezu identisch mit denen des ursprünglichen MAb. In transgenen Haarwurzelkulturen von S. khasianum wurden bis zu 220 ng rekombinantes As-scFv pro Milligramm löslichen Proteins produziert. Die Konzentration der Solasodinglykoside war in der transgenen Pflanze 2,3-mal höher als in der Wildtyp-Haarwurzel, was den löslichen As-scFv-Spiegel widerspiegelt. Die aus rekombinanten Haarwurzeln regenerierte rekombinante S. khasianum-Pflanze enthielt im Vergleich zur regenerierten Pflanze aus der Wildtyp-Haarwurzel eine 2,3-fache Konzentration an Solasodinglykosid. Diese Ergebnisse lassen darauf schließen, dass der in der gentechnisch veränderten Pflanze exprimierte scFv-Antikörper den Antigenspiegel kontrolliert. Diese Methode ist der erste Erfolg bei der molekularen Züchtung sekundärer Metabolite ohne Kenntnis des biosynthetischen Enzyms.