Zeitschrift für Zellwissenschaft und Therapie
Offener Zugang

Abstrakt

Nucleolin transportiert Hsp72 zur Plasmamembran und bereitet es so auf seine Freisetzung in die Mikroumgebung vor

Appukuttan NR Pradeep, Alexzander Asea und Punit Kaur

Zweck: Unsere früheren Studien haben gezeigt, dass Hitzestress die Freisetzung von Hsp72 aus Zellen durch einen Mechanismus induziert, der unabhängig vom klassischen Proteintransportweg ist. Der genaue Mechanismus, durch den Hsp72, ein führerloses Protein, Zugang zum extrazellulären Milieu erhält, ist jedoch noch unbekannt. Materialien und Methoden: Diese Studie soll den Mechanismus bestimmen, durch den der intrazelluläre Transport und die Freisetzung von Hsp72 erfolgen. Die in dieser Studie präsentierten Daten deuten auf einen intrazellulären Hsp72-Transport mittels Western Blotting und Durchflusszytometrie hin. Außerdem wurden durch In-Gel-Verdauung und LC-MS/MS unbekannte membrangebundene Proteine ​​identifiziert. Ergebnisse: Wir zeigen, dass innerhalb von 60 Minuten nach der ersten Exposition von Zellen gegenüber einer Hitzeschockbehandlung plasmamembrangebundenes Hsp72 abgestoßen und in zytosolische Kompartimente umverteilt wird. Die Hemmung des aktiven Zelltransports durch Vorbehandlung von Zellen mit Cytochalasin B verhinderte die Umverteilung von Hsp72 von der Plasmamembran ins Zytosol vollständig. Die Vernetzung von Plasmamembran-gebundenen Proteinen mit Hsp72, gefolgt von Western-Blot-Analyse und LC-MS/MS-Analyse, ergab mindestens sieben Interaktionspartner mit Hsp72, darunter Nucleolin, Hsp90, gp96, CAP2, TLR2, 4 und 7. Die Transfektion von Zellen mit Nucleolin-siRNA hemmte die Baseline- und Hitzeschock-induzierte Hsp72-Freisetzung vollständig. Schlussfolgerungen: Zusammenfassend zeigt diese Studie zum ersten Mal, dass die Plasmamembran als Reservoir für Hsp72 fungiert, und legt nahe, dass Nucleolin eine wichtige Rolle beim Transport und der Freisetzung von Hsp72 spielt.