Zeitschrift für klinische und zelluläre Immunologie
Offener Zugang

Abstrakt

Relevanz der Albuminnitroxidation bei rheumatoider Arthritis: Eine biochemische und klinische Studie

Zarina Arif, Mir Yasir Arfat, Jamal Ahmad, Asif Zaman, Shireen Naaz Islam und M Asad Khan

Ziel: Untersuchung der Rolle von mit Peroxynitrit modifiziertem Humanserumalbumin (nitroxidiertes Albumin) bei rheumatoider Arthritis. Methoden: Humanserumalbumin wurde Peroxynitrit ausgesetzt und Veränderungen in der Albuminstruktur wurden mittels UV-sichtbarer, Fluoreszenz- und Zirkulardichroismusspektroskopie, Thioflavin T, Kongorot-Bindung und abgeschwächter Totalreflexions-Fourier-transformierter Infrarotspektroskopie (ATR-FTIR) überwacht. Die antioxidativen Eigenschaften von nitroxidiertem Albumin wurden mittels eines durch freie Radikale induzierten RBC-Hämolysetests ausgewertet. Marker der Proteinoxidation wie Carbonyl, Thiol, Dityrosin und RBC-Hämolyse wurden in Seren von RA-Patienten untersucht. Die Bindung von Autoantikörpern in RA-Seren (n=50) mit nitroxidiertem Albumin wurde mittels direkter Bindung, Hemm-ELISA und elektrophoretischem Mobilitäts-Shift-Gel-Assay untersucht. Ergebnisse: Das nitroxidierte Albumin zeigte die Bildung von Nitrotyrosin, Nitrotryptophan, Carbonyl, Dityrosin und eine Verringerung der Tyrosin- und Tryptophanfluoreszenz und α-Helizität. Die Fluoreszenzemissionsintensitäten von Thioflavin T und Kongorot wurden durch die Bindung mit nitroxidiertem Albumin verstärkt. Darüber hinaus wurden Sekundär- und Tertiärstrukturen des nitroxidierten Albumins verändert, wie durch ATR-FTIR, Fern- und Nah-UV-CD nachgewiesen wurde. Autoantikörper in RA-Seren (oder aus Seren gereinigtes IgG) zeigten eine verstärkte Bindung mit nitroxidiertem Albumin, wie durch direkte Bindung und Hemm-ELISA bestimmt wurde. Proteincarbonyle, Dityrosin und RBC-Hämolyse waren signifikant hoch, aber Thiol war in RA-Seren im Vergleich zu alters- und geschlechtsangepassten Kontrollpersonen signifikant niedrig. Schlussfolgerung: Endogen verfügbares Peroxynitrit kann Albumin nitrieren und oxidieren, was zu einer Proteinnitrierung/Oxidation und der anschließenden Bildung von Querverbindungen, Aggregaten und immunogenem nitroxidiertem Albumin führt. Daher kann nitroxidiertes Albumin ein potenzieller Auslöser für Autoantikörper bei RA-Patienten sein.