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Abstrakt

Wiederherstellung der mitochondrialen Genexpression mithilfe eines geklonten menschlichen Gens in einem Lungenzellmutanten des chinesischen Hamsters

Zaki A Sherif und Carolyn W Broome

Hintergrund: Gal-32 ist ein nukleärer Mutant der Lungenzellen des chinesischen Hamsters, der aufgrund eines Defekts in der mitochondrialen Proteinsynthese nicht in Galaktose wachsen kann. Da das Produkt des Gal-32-Gens unbekannt war, war es zwingend erforderlich, phänotypische Komplementation zu verwenden, um ein menschliches Gen zu klonen, das die Gal-32-Mutation korrigierte.

Ergebnisse: Rezessive Gal-32-Zellen wurden mit pSV2-neo-Plasmid-DNA und rekombinanter DNA aus einer menschlichen Genombibliothek kotransformiert, die das dominante menschliche Gal+-Gen und ein Chloramphenicol-Resistenzgen (camr) enthält, das im pSV13-Vektor vorhanden ist. Primäre Transformanten wurden durch Wachstum in Galaktose und dem Neomycin-Analogon G418 ausgewählt. Um das menschliche Gal+-Gen zu retten, wurde eine Genombibliothek mit primärer Transformanten-DNA und dem pCV108-Cosmidvektor erstellt. Das camr-Gen wurde verwendet, um Klone mit nahegelegenen menschlichen Sequenzen zu identifizieren. DNA aus zwei camr, Alu-hybridisierenden Klonen konnte die rezessiven Gal-32-Zellen in den Gal+-Phänotyp transformieren und die mitochondriale Proteinsynthese wiederherstellen.

Schlussfolgerung: Diese Daten zeigen die Isolierung von zwei pCV108-Transformanten-rekombinanten Klonen, die ein menschliches Gen enthalten, das die Gal-32-Mutation des chinesischen Hamsters ergänzt und den Galaktosestoffwechsel wiederherstellt.