Anatomie und Physiologie: Aktuelle Forschung
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Abstrakt

Rolle von PKCb in der Signaltransduktion für den 1,25D3-MARRS-Rezeptor (ERp57/PDIA3) bei steroidhormonstimulierter Calciumextrusion

Sakara Tunsophon und Ilka Nemere

Proteinkinase C (PKC) ist an der schnellen 1,25(OH)2D3-vermittelten Extrusion von Kalzium aus Darmepithelzellen von Hühnern beteiligt. Ein früherer Bericht zeigte, dass die Umverteilung von PKCa und PKCb der Dosis-Wirkungs-Kurve für die Kalziumextrusion entsprach. Wir untersuchten die Rolle von sowohl PKCa als auch PKCb bei der hormonstimulierten Kalziumextrusion mithilfe von siRNA in Primärkulturen von Darmzellen. Die Ergebnisse zeigten, dass es bei der Kalziumextrusion in mit siRNA gegen PKCa transfizierten Zellen keine Veränderung gab, während die siRNA gegen PKCb die Kalziumextrusion in 1,25(OH)2D3-behandelten Zellen im Vergleich zu den entsprechenden hormonbehandelten Zellen in transfizierten und nicht-transfizierten Zellen signifikant verringerte (P < 0,01). Ähnliche Ergebnisse wurden auch bei der Verwendung chemischer Inhibitoren von PKC a (Safingol) und PKC b ([3-(1-(3-Imidazol-1-ylpropyl)-1H-indol-3-yl)-4-anilino-1H-pyrrol-2,5-dion]) in Darmzellsuspension erzielt. Die Ergebnisse zeigten, dass PKC b die Extrusion von Calcium aus mit 1,25(OH) 2 D 3 behandelten Darmzellen hemmte (was zu einer erhöhten Calciumaufnahme führte), verglichen mit Fahrzeugkontrollen (P < 0,001); der PKC a-Blocker zeigte keinen Unterschied bei der Calciumextrusion zwischen den Behandlungsgruppen. Mittels konfokaler Mikroskopie reduzierten wir die Hormonexposition auf 30 Sekunden, um die Umverteilung von PKC a und PKC b zu beobachten. Es wurde festgestellt, dass eine schnelle Umverteilung von PKC a die Fluoreszenz in der apikalen Membranregion nach einer 30-sekündigen Exposition der Zellen gegenüber 300 oder 650 pM 1,25(OH) 2 D 3 ( P < 0,01 bzw. 0,001) signifikant erhöht. Im Vergleich dazu wurde festgestellt, dass die PKC b-Immunfluoreszenz im basalen lateralen Bereich der Zellen im Vergleich zu den Kontrollen nach der Exposition der Zellen gegenüber 300 ( P < 0,01) oder 650 pM ( P < 0,05) Seco-Steroid signifikant erhöht ist. Die Ergebnisse legen nahe, dass PKC a der PKC-Isotyp ist, der am 1,25(OH) 2 D 3 -vermittelten Calcium-Efflux in Darmepithelzellen beteiligt ist.