Zeitschrift für Proteomik und Bioinformatik
Offener Zugang

Abstrakt

Sekretomische Analyse der Maus-Plexus-Choroid-Zelllinie ECPC-4 mittels zweidimensionaler Gelelektrophorese gekoppelt mit Massenspektrometrie

Masaoki Takano, Mari Uramoto, Mieko Otani, Kenji Matsuura, Keiji Sano und Shogo Matsuyama

Der Plexus choroideus (CP), der Hauptproduktionsort der Zerebrospinalflüssigkeit (CSF), ist für die an Meningitis und Immunsystemen beteiligten Entzündungsmediatoren verantwortlich. Die Maus-Plexus-choroideus-Zelllinie ECPC-4 ist bekanntermaßen für die Analyse von CP-Funktionen nützlich. In dieser Studie führten wir die Sekretomanalyse von ECPC-4 mithilfe einer zweidimensionalen Gelelektrophorese (2-DE) gefolgt von Massenspektrometrie durch. Im konditionierten Medium von ECPC-4 wurden 22 sekretierte Proteine ​​identifiziert. Dabei handelte es sich um ein saures, cysteinreiches sezerniertes Protein (SPARC), den Plasminogenaktivator-Inhibitor 1 (PAI-1) und weitere Substanzen (Vinculin, verwandtes Hitzeschockprotein 71 kDa, Moesin, Tubulin ß2A, Fascin, Calreticulin, Gamma-Aktin, Alkoholdehydrogenase, Malatdehydrogenase, Rho-GDP-Dissoziationsinhibitor Alpha, Phosphoglyceratmutase 1, translationskontrolliertes Tumorprotein, Phosphatidylethanolamin-Bindungsprotein 1, Peroxiredoxin 1 Typ II, Peroxiredoxin 1, Myosin-Light-Polypeptid 6, Cofilin-1, Nukleosid-Diphosphat-Kinase A, Peptidyl-Prolylcis-Trans-Isomerase A[PPI-A] und Galectin 1). Diese Proteine ​​konnten als Zytoskelett/Intermediärfilament, Proteinfaltung, Signalübertragung, Zellwachstum, Stoffwechsel und Redoxregulierungsgruppen klassifiziert werden, was nahelegt, dass sie mit den CP-Funktionen in Verbindung stehen könnten. Außerdem war der Spiegel von vier Proteinen im konditionierten Medium von ECPC-4, das mit Lipid A behandelt wurde, verändert. Die Proteasomuntereinheit Alpha Typ 1 und die Nukleosiddiphosphatkinase A waren im Vergleich zum konditionierten Medium von unbehandeltem ECPC-4 signifikant erhöht und Gamma-Aktin und Galectin-1 waren signifikant verringert. Western Blotting bestätigte auch die Veränderungen in der Proteasomuntereinheit Alpha Typ 1, Galectin-1 und der Nukleosiddiphosphatkinase A. Dies legt nahe, dass diese Proteine ​​eine wichtige Rolle bei Entzündungen wie Meningitis spielen. ECPC-4 ist wie CP-Epithelzellen nützlich zur Analyse der CP-Funktionen.