Zeitschrift für Chromatographie und Trenntechniken
Offener Zugang

Abstrakt

Trennung und Analyse von Mono-, Di- und Triphosphatnukleotiden aus Zellextrakten mittels Umkehrphasen-HPLC

Praveen Kusumanchi, Rachel Rogers, Ting Zhang, Suthat Liangpunsakul, Zhihong Yang, Hiremagalur N Jayaram

Der Schwerpunkt der vorliegenden Studie lag auf der Entwicklung einer einfachen, zuverlässigen und hochempfindlichen Ionenpaar-Umkehrphasen-Hochleistungsflüssigkeitschromatographie zur Trennung und Quantifizierung von Purin-, Pyrimidin- und Pyridinnukleotiden. Zunächst optimierten wir die Säulenbedingungen, um eine Basislinientrennung und Quantifizierung von 15 Nukleotiden zu erreichen. Die Mindestmenge, die zum reproduzierbaren und hochgenauen Nachweis aller Ribonukleotide erforderlich war, betrug 10 pmol. Die Kalibrierungskurven für alle Nukleotidstandards waren im Bereich von 10 bis 200 pmol linear. Diese Methode kann erfolgreich zur gleichzeitigen Quantifizierung aller Nukleotide in Studien mit Nukleotidinhibitoren wie Tiazofurin und Benzamidribosid in Krebszelllinien eingesetzt werden. Dies ist der erste Bericht, der die Trennung aller 15 Nukleotide in einer einzigen Injektion zeigt.