Zeitschrift für klinische und zelluläre Immunologie
Offener Zugang

Abstrakt

Stabile Expression und Charakterisierung eines optimierten Mannose-Rezeptors

David J. Vigerust, Sherell Vick und Virginia L. Shepherd

Der Mannose-Rezeptor (MR) ist ein Makrophagen-Oberflächenrezeptor, der pathogenassoziierte molekulare Muster (PAMPs) von einer Vielzahl bakterieller, pilzlicher und viraler Pathogene erkennt. Funktionelle Studien des MR werden durch die Knappheit menschlicher Zelllinien, die den Rezeptor exprimieren, erschwert. Derzeit verfügbare Modellsysteme für die Untersuchung der MR-Biologie weisen häufig niedrige Expressionsniveaus auf und behalten viele der klassischen MR-Eigenschaften nicht bei. Obwohl mehrere Labore über eine vorübergehende und stabile Expression von MR aus Plasmiden berichtet haben, deuten vorläufige Daten aus unserem Labor darauf hin, dass diese Plasmide ein Protein produzieren, dem kritische Domänen fehlen und das häufig über einen längeren Zeitraum nicht stabil ist. In diesem aktuellen Bericht beschreiben wir die Erzeugung und Charakterisierung eines neuartigen menschlichen Codon-optimierten Systems für die vorübergehende und stabile MR-Expression. Seltene Codons und Sequenzen, die zur mRNA-Instabilität beitragen, wurden modifiziert, um qualitativ und quantitativ verbesserte mRNA zu produzieren. Die konfokale Bildgebung des vorübergehend und stabil exprimierten optimierten Rezeptors zeigt eine Verteilung, die mit früheren Berichten übereinstimmt. Um die funktionellen Eigenschaften des optimierten Rezeptors zu demonstrieren, zeigen wir weiter, dass die Einführung eines codonoptimierten MR-Plasmids eine MR-assoziierte Phagozytose von S. aureus auf nicht-phagozytische HeLa-Zellen übertragen kann. Wir zeigen, dass drei Moleküle an der Bindung und Internalisierung von S. aureus beteiligt sind. Es wurde festgestellt, dass MR nach Exposition gegenüber pHrodo-gefärbtem S. aureus mit Toll-like-Rezeptor 2 (TLR2) und Rab5 kolokalisiert , was auf eine Kooperation zwischen den drei Molekülen bei der Bindung und Internalisierung des Bakterienpartikels hindeutet. Diese Studie beschreibt einen transfektionsfähigen, optimierten MR-Rezeptor mit funktionellen Eigenschaften ähnlich dem Wildtyp-Rezeptor und demonstriert weiter ein neues System für die weitere Untersuchung der MR-Biologie und -Funktion