Zeitschrift für Zellwissenschaft und Therapie
Offener Zugang
ISSN: 2157-7013
ISSN: 2157-7013
Fazlina Nordin, Gee Jun Tye, Joop Gaken und Farzin Farzaneh
Immer mehr Beweise zeigen, dass die erzwungene Expression einer kleinen Gruppe von Genen, darunter Oct-3/4, KLF4, Sox2 und c-Myc, die Umprogrammierung zuvor differenzierter Zellen bewirken kann, um induzierte pluripotente Stammzellen (iPSCs) zu erzeugen. Die Erzeugung von iPSCs durch genetische Modifikationen erhöht jedoch das Risiko einer malignen Transformation. Daher ist eine effiziente In-vitro-Umprogrammierung differenzierter Zellen ohne irreversible genetische Modifikation äußerst wünschenswert. Der verbesserte Transaktivator der Transkription kappa (TATκ), ein synthetisches TAT-HIV, verleiht die Fähigkeit, mehrere Proteine in Zielzellen zu transportieren, und ist somit ein potenzieller alternativer Transportmechanismus für Transkriptionsfaktoren oder Therapeutika. Unter Verwendung des grün fluoreszierenden Proteins (GFP) und Apoptin als Modellproteine haben wir kürzlich eine Strategie zur Erzeugung von Zelllinien beschrieben, die Proteine mit einer modifizierten HIV-TAT-Proteintransduktionsdomäne (PTD) für die anschließende proteintransduktionsvermittelte Aufnahme durch Zielzellen absondern. Mit dieser Strategie haben wir 293T-Zellen erzeugt, die die pluripotenten Faktoren Oct-3/4 oder KLF4 in Fusion mit TATκ sezernieren. Oct-3/4 und KLF4 wurden im Kulturmedium der transduzierten 293T-Zelle nachgewiesen und die Aufnahme von Oct-3/4 durch die hämatopoetischen Zelllinien JURKAT und FDCP-1 wurde durch Western-Blot-Analyse bestätigt. KLF4 war im Kulturmedium der produzierenden 293T-Zelle vorhanden, aber wir können noch keine Aufnahme durch Zielzellen nachweisen. Aufgrund der erzielten Ergebnisse hoffen wir, dass diese stabilen Zelllinien mit gemischter Population eine wichtige Rolle bei der Erzeugung von iPSCs für therapeutische Zwecke spielen können.