Jane aus Mwambu
Diese Studie prüft die Hypothese, dass die Invasion teilweise transformierter Keratinozyten durch diffusible, proinvasive Signale eingeleitet wird, die von artspezifischen Fibroblasten ausgehen. In vitro wurden organotypische Kulturen neoplastischer menschlicher Mundschleimhaut durch Züchtung einer teilweise transformierten, nicht tumorbildenden Keratinozyten-Zelllinie aus einer dysplastischen menschlichen Mundläsion (DOK ECACC94122104) auf verschiedenen Arten von Bindegewebeäquivalenten hergestellt. Die kultivierten Gewebe wurden mittels Histomorphometrie (Tiefe und Bereich der Invasion: Dinv, Ainv) und Immunhistochemie analysiert. Das Vorhandensein menschlicher Fibroblasten in der Matrix induzierte eine lokale Invasion von DOK (Dinv = 95,6 ± 7,1 μm, Ainv = 45,8 ± 3,5 %). Eine minimale Invasion (P < 0,05) wurde beobachtet, wenn DOK auf einer einfachen Kollagenmatrix (Dinv = 14,1 ± 2,1 μm, Ainv = 3,7 ± 0,8 %) oder auf Matrizen mit Fibroblasten von Mäusen (Dinv = 11,5 ± 4,0 μm, Ainv = 4,3 ± 1,0 %) oder Ratten (Dinv = 15,6 ± 1,2 μm, Ainv = 6,1 ± 0,5 %) wuchs. In diesen Kulturen konnte eine lokale Invasion durch die Anwesenheit menschlicher Fibroblasten in einer unteren Schicht der Kollagenmatrix (P < 0,05) oder durch konditioniertes Medium aus organotypischen Kulturen von DOK auf einer Matrix mit menschlichen Fibroblasten (P < 0,05) ausgelöst werden, nicht jedoch durch konditioniertes Medium aus Monokulturen menschlicher Fibroblasten (P > 0,05). Ablagerungen von menschlichem Kollagen IV wurden an der Grenzfläche zwischen Epithel und Matrix nur dann beobachtet, wenn DOK sich invasiv verhielt. Abschließend lässt sich sagen, dass die Invasion partiell transformierter oraler Keratinozyten durch keratinozyteninduzierte, aus Fibroblasten stammende diffusible Faktoren auf speziesspezifische Weise ausgelöst wurde und mit einer Neusynthese von Kollagen IV verbunden war. Immer mehr Berichte legen nahe, dass Fibroblasten aus dem Tumorstroma aktiv zur malignen Progression von Epithelneoplasmen beitragen. Sowohl normale als auch aktivierte karzinomassoziierte Fibroblasten erhöhen nachweislich die Invasivität menschlicher Plattenepithelkarzinom-Zelllinien (SCC) in vitro. Mehrere Berichte über Experimente mit Monolayer-Kulturen legen nahe, dass dieser Effekt auf von Fibroblasten synthetisierte diffusible Faktoren zurückzuführen sein könnte. Kürzlich wurde jedoch darauf hingewiesen, dass sich die Ergebnisse aus Studien, die an herkömmlichen zweidimensionalen Monolayer-Zellkulturmodellen durchgeführt wurden, nur schwer auf die Situation in vivo übertragen lassen, da sie die viel komplexeren Mechanismen nicht berücksichtigen, die am dreidimensionalen Prozess der Krebsentstehung und -invasivität beteiligt sind. Daher sind weitere experimentelle Beweise an komplexeren organotypischen In-vitro-Modellen erforderlich, die die dreidimensionale Gewebestruktur und Zell-Zell-Interaktionen in vivo genau nachahmen, um die spezifischen Fibroblasten-bezogenen Faktoren zu identifizieren, die für die Invasivität von SCCs in vivo von großer Bedeutung sind. Andererseits wurden in früheren Studien vollständig transformierte Zelllinien mit einem etablierten invasiven In-vivo-Phänotyp verwendet.Ob derselbe Fibroblasten-abhängige Mechanismus der Invasivität in früheren Stadien der Keratinozytentransformation stattfindet, wenn die lokale Invasion eingeleitet wird, ist noch nicht bekannt und stand deshalb im Mittelpunkt dieser Untersuchung. Ein weiterer wichtiger Fibroblasten-bezogener Faktor für die In-vivo-Invasivität von Karzinomzellen scheint der Ursprung der Fibroblasten zu sein. Es wurde nachgewiesen, dass die Organspezifität von Fibroblasten eine Rolle bei der Förderung der Karzinomzellinvasion spielt. Mehrere Studien haben berichtet, dass in Nacktmäusen nur eine begrenzte Anzahl von Tumorzellen menschlichen Ursprungs wuchs. Die Sensibilität des In-vivo-Malignitätstests für menschliche neoplastische Zellen, insbesondere in frühen Stadien der Malignität, wurde in Frage gestellt, und es wurden Versuche unternommen, funktionell zuverlässige In-vivo-Versuchsmodelle von menschlichem Gewebe in Mäusen zu entwickeln, indem die Mikroumgebung der Mäuse durch Zugabe menschlicher Fibroblasten vor der Xenotransplantation der menschlichen Epithelzellen humanisiert wurde, aber die Frage der Speziesspezifität wurde teilweise aufgrund des Mangels an geeigneten Versuchsmodellen nicht weiter untersucht. Die spätere Entwicklung heterologer organotypischer Modelle hat solche Studien durch die Konstruktion von Modellen mit Zelltypen unterschiedlicher Spezies ermöglicht. In der vorliegenden Studie haben wir solche organotypischen Modelle verwendet, um 1) die Hypothese zu prüfen, dass die Invasion teilweise transformierter oraler Epithelzellen durch diffusible, proinvasive Signale ausgelöst wird, die von speziesspezifischen oralen Fibroblasten ausgehen; 2) zu untersuchen, ob die Wachstumsfaktoren, die laut Monolayer-Kulturstudien für die Invasivität von SCC wichtig sind, eine Schlüsselrolle für die lokale Invasivität teilweise transformierter oraler Keratinozyten in organotypischen dreidimensionalen Kulturen spielen; und 3) spezifische phänotypische Veränderungen teilweise transformierter oraler Keratinozyten zu ermitteln, die mit dem Übergang von einem nichtinvasiven zu einem invasiven Verhalten assoziiert sind. Teilweise transformierte menschliche orale Keratinozyten wurden von der European Collection of Cell Cultures bezogen und routinemäßig in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium gezüchtet, das mit 10 % fötalem Kälberserum, 20 μg/ml L-Glutamin und 5 μg/ml Hydrocortison ergänzt wurde. Primäre normale menschliche orale Fibroblasten wurden aus sechs Biopsien der menschlichen Mundschleimhaut isoliert, nachdem Weisheitszähne wie zuvor beschrieben chirurgisch entfernt worden waren. Die Studie, die vom Ethikkomitee der Universität Bergen genehmigt wurde, umfasste klinisch gesunde Spender nur nach Einverständniserklärung. Die Forschung wurde in der Abteilung für Zahnheilkunde, Ora, durchgeführtMehrere Studien haben berichtet, dass in Nacktmäusen nur eine begrenzte Zahl von Tumorzellen menschlichen Ursprungs wuchs. Die Sensitivität des In-vivo-Malignitätstests für menschliche neoplastische Zellen, insbesondere in frühen Stadien der Malignität, wurde in Frage gestellt, und es wurden Versuche unternommen, funktionell zuverlässige In-vivo-Versuchsmodelle von menschlichem Gewebe in Mäusen zu entwickeln, indem die Mikroumgebung der Mäuse durch Zugabe menschlicher Fibroblasten humanisiert wurde, bevor die menschlichen Epithelzellen xenotransplantiert wurden. Die Frage der Speziesspezifität wurde jedoch teilweise aufgrund des Mangels an geeigneten Versuchsmodellen nicht weiter untersucht. Die spätere Entwicklung heterologer organotypischer Modelle hat solche Studien durch die Konstruktion von Modellen mit Zelltypen verschiedener Spezies ermöglicht. In der vorliegenden Studie haben wir solche organotypischen Modelle verwendet, um 1) die Hypothese zu testen, dass die Invasion teilweise transformierter oraler Epithelzellen durch diffusible, proinvasive Signale ausgelöst wird, die von speziesspezifischen oralen Fibroblasten bereitgestellt werden; 2) zu untersuchen, ob die Wachstumsfaktoren, die in Monolayer-Kulturstudien als wichtig für die Invasivität von SCC genannt wurden, eine Schlüsselrolle für die lokale Invasivität teilweise transformierter oraler Keratinozyten in organotypischen dreidimensionalen Kulturen spielen; und 3) spezifische phänotypische Veränderungen teilweise transformierter oraler Keratinozyten zu ermitteln, die mit dem Übergang von einem nichtinvasiven zu einem invasiven Verhalten in Zusammenhang stehen. Teilweise transformierte menschliche orale Keratinozyten wurden von der European Collection of Cell Cultures bezogen und routinemäßig in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium gezüchtet, das mit 10 % fötalem Kälberserum, 20 μg/ml L-Glutamin und 5 μg/ml Hydrocortison ergänzt wurde. Primäre normale menschliche orale Fibroblasten wurden aus sechs Biopsien der menschlichen Mundschleimhaut isoliert, nachdem Weisheitszähne wie zuvor beschrieben chirurgisch entfernt worden waren. Die Studie, die vom Ethikkomitee der Universität Bergen genehmigt wurde, schloss klinisch gesunde Spender nur nach informierter Einverständniserklärung ein. Die Forschung wurde in der Abteilung für Zahnheilkunde in Auer durchgeführt.Mehrere Studien haben berichtet, dass in Nacktmäusen nur eine begrenzte Zahl von Tumorzellen menschlichen Ursprungs wuchs. Die Sensitivität des In-vivo-Malignitätstests für menschliche neoplastische Zellen, insbesondere in frühen Stadien der Malignität, wurde in Frage gestellt, und es wurden Versuche unternommen, funktionell zuverlässige In-vivo-Versuchsmodelle von menschlichem Gewebe in Mäusen zu entwickeln, indem die Mikroumgebung der Mäuse durch Zugabe menschlicher Fibroblasten humanisiert wurde, bevor die menschlichen Epithelzellen xenotransplantiert wurden. Die Frage der Speziesspezifität wurde jedoch teilweise aufgrund des Mangels an geeigneten Versuchsmodellen nicht weiter untersucht. Die spätere Entwicklung heterologer organotypischer Modelle hat solche Studien durch die Konstruktion von Modellen mit Zelltypen verschiedener Spezies ermöglicht. In der vorliegenden Studie haben wir solche organotypischen Modelle verwendet, um 1) die Hypothese zu testen, dass die Invasion teilweise transformierter oraler Epithelzellen durch diffusible, proinvasive Signale ausgelöst wird, die von speziesspezifischen oralen Fibroblasten bereitgestellt werden; 2) zu untersuchen, ob die Wachstumsfaktoren, die in Monolayer-Kulturstudien als wichtig für die Invasivität von SCC genannt wurden, eine Schlüsselrolle für die lokale Invasivität teilweise transformierter oraler Keratinozyten in organotypischen dreidimensionalen Kulturen spielen; und 3) spezifische phänotypische Veränderungen teilweise transformierter oraler Keratinozyten zu ermitteln, die mit dem Übergang von einem nichtinvasiven zu einem invasiven Verhalten in Zusammenhang stehen. Teilweise transformierte menschliche orale Keratinozyten wurden von der European Collection of Cell Cultures bezogen und routinemäßig in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium gezüchtet, das mit 10 % fötalem Kälberserum, 20 μg/ml L-Glutamin und 5 μg/ml Hydrocortison ergänzt wurde. Primäre normale menschliche orale Fibroblasten wurden aus sechs Biopsien der menschlichen Mundschleimhaut isoliert, nachdem Weisheitszähne wie zuvor beschrieben chirurgisch entfernt worden waren. Die Studie, die vom Ethikkomitee der Universität Bergen genehmigt wurde, schloss klinisch gesunde Spender nur nach informierter Einverständniserklärung ein. Die Forschung wurde in der Abteilung für Zahnheilkunde in Auer durchgeführt.In der vorliegenden Studie haben wir solche organotypischen Modelle verwendet, 1) um die Hypothese zu prüfen, dass die Invasion teilweise transformierter oraler Epithelzellen durch diffusible, proinvasive Signale ausgelöst wird, die von artspezifischen oralen Fibroblasten ausgehen; 2) um zu untersuchen, ob die Wachstumsfaktoren, die in Monolayer-Kulturstudien als wichtig für die Invasivität von SCC genannt wurden, eine Schlüsselrolle für die lokale Invasivität teilweise transformierter oraler Keratinozyten in organotypischen dreidimensionalen Kulturen spielen, und 3) um spezifische phänotypische Veränderungen teilweise transformierter oraler Keratinozyten zu ermitteln, die mit dem Übergang von nichtinvasivem zu invasivem Verhalten verbunden sind. Teilweise transformierte humane orale Keratinozyten wurden von der European Collection of Cell Cultures bezogen und routinemäßig in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium gezüchtet, das mit 10 % fötalem Kälberserum, 20 μg/ml L-Glutamin und 5 μg/ml Hydrocortison ergänzt wurde. Primäre normale menschliche orale Fibroblasten wurden aus sechs Biopsien der menschlichen Mundschleimhaut isoliert, nachdem Weisheitszähne wie zuvor beschrieben chirurgisch entfernt worden waren. Die Studie, die vom Ethikkomitee der Universität Bergen genehmigt wurde, umfasste klinisch gesunde Spender nur nach Einverständniserklärung. Die Forschung wurde in der Abteilung für Zahnheilkunde, Ora durchgeführt.In der vorliegenden Studie haben wir solche organotypischen Modelle verwendet, 1) um die Hypothese zu prüfen, dass die Invasion teilweise transformierter oraler Epithelzellen durch diffusible, proinvasive Signale ausgelöst wird, die von artspezifischen oralen Fibroblasten ausgehen; 2) um zu untersuchen, ob die Wachstumsfaktoren, die in Monolayer-Kulturstudien als wichtig für die Invasivität von SCC genannt wurden, eine Schlüsselrolle für die lokale Invasivität teilweise transformierter oraler Keratinozyten in organotypischen dreidimensionalen Kulturen spielen, und 3) um spezifische phänotypische Veränderungen teilweise transformierter oraler Keratinozyten zu ermitteln, die mit dem Übergang von nichtinvasivem zu invasivem Verhalten verbunden sind. Teilweise transformierte humane orale Keratinozyten wurden von der European Collection of Cell Cultures bezogen und routinemäßig in Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium gezüchtet, das mit 10 % fötalem Kälberserum, 20 μg/ml L-Glutamin und 5 μg/ml Hydrocortison ergänzt wurde. Primäre normale menschliche orale Fibroblasten wurden aus sechs Biopsien der menschlichen Mundschleimhaut isoliert, nachdem Weisheitszähne wie zuvor beschrieben chirurgisch entfernt worden waren. Die Studie, die vom Ethikkomitee der Universität Bergen genehmigt wurde, umfasste klinisch gesunde Spender nur nach Einverständniserklärung. Die Forschung wurde in der Abteilung für Zahnheilkunde, Ora durchgeführt.