Zeitschrift für Leukämie
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Abstrakt

Nutzung von Deep Sequencing der nächsten Generation zur Analyse der BCR-ABL1-Kinasedomänenmutation bei Patienten mit Imatinib-resistenter chronischer myeloischer Leukämie in Vietnam

Duong CQ, Nguyen C, Nguyen TT, Nguyen LV, Pham HQ, Trinh HTT, Tran HC, Le TQ, Pham HT, Hong TH, Nguyen TH, Truong HN, Bach KQ und Nguyen TA

Hintergrund: Chronische myeloische Leukämie ist eine klonale myeloproliferative Neoplasie, die durch das Vorhandensein der chromosomalen Translokation t(9; 22)(q34; q11) gekennzeichnet ist. Diese tritt in über 95 % der Fälle auf und führt zum BCR-ABL1-Fusionsprotein mit hoher Tyrosinkinaseaktivität. In den letzten Jahrzehnten wurden Imatinib und andere Generationen von Tyrosinkinasehemmern erfolgreich zur gezielten Therapie der Krankheit eingesetzt. In jüngster Zeit wurden jedoch viele Fälle von Arzneimittelresistenz gemeldet, die auf die Mutation innerhalb der Kinasedomäne des BCR-ABL1-Fusionsgens zurückzuführen sind. Um weitere Informationen zu dieser Inzidenz zu erhalten, führten wir eine retrospektive Studie an 141 Patienten mit Imatinib-resistenter chronischer myeloischer Leukämie durch, um die Mutation der Kinasedomäne durch Tiefensequenzierung zu analysieren. Eine weitere Gruppe von 20 unbehandelten Patienten wurde als Kontrolle hinzugefügt. Methoden: RNA aus Knochenmarkszellen wurde extrahiert und anschließend eine cDNA-Synthese durchgeführt. Es wurde eine verschachtelte Polymerase-Kettenreaktion durchgeführt, um die Kinasedomäne des BCR-ABL1-Fusionsgens zu amplifizieren. Größe und Konzentration der amplifizierten Produkte wurden überwacht und eine DNA-Sequenzierungsbibliothek erstellt. Die Sequenzanalyse wurde mit dem Illumina MiSeq-Sequenzer und der Sequence Pilot-Software durchgeführt. Die Sequenzierungsergebnisse wurden zufällig für die Sanger-Sequenzierung ausgewählt. Ergebnisse: Keiner der Kontrollgruppen war positiv auf eine Mutation der Kinasedomäne. Bei 47 von 141 Patienten (33 %) wurde mindestens eine Nukleotidsubstitution nachgewiesen. Die Sequenzierungsergebnisse wurden auch durch die Sanger-Sequenzierung bestätigt. Von diesen 47 Proben wurden 72 Nukleotidsubstitutionen von 28 Typen und 24 veränderte Codons identifiziert. Unter diesen waren Y253F/H, M351T, G250E, F359V/I und M244V die häufigsten Mutationen, während T315I nur 4,1 % ausmachte. Es gab auch eine Reihe von Proben mit mehreren Substitutionen und neuen Variationen. Schlussfolgerung: Die Tiefensequenzierung der nächsten Generation ist eine empfindliche und effektive Methode zum Nachweis von Kinasedomänenmutationen, und unsere Ergebnisse könnten weitere Informationen über die Arzneimittelresistenzmutation bei chronischer myeloischer Leukämie liefern.