Enzymtechnik
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Abstrakt

Ein menschliches Peptid schützt vor therapiebedingter Leukämie

R. Wiehe

Die Krebsbehandlung mit Doxorubicin und Etoposid erhöht das Risiko von Rearrangements im Gen für Leukämie mit gemischter Abstammung oder myeloische/lymphoide Leukämie (MLL) [1-3], das eine 7,3 kb große Breakpoint-Cluster-Region (MLLbcr) auf Chromosom 11 mit einem therapiebedingten 0,4 kb großen Hotspot umfasst [2]. Es wurde gezeigt, dass sich das mitochondriale Enzym Endonuclease G (EndoG) nach einer genotoxischen Behandlung im Zellkern ansammelt und Replikationsstress auslöst, wo es MLLbcr spaltet [4]. Ein GFP-basiertes Reporterplasmid, das MLLbcr-Rearrangements nachahmt, wurde konstruiert [5] und zum Screening einer fraktionierten lyophilisierten Hämofiltrat-Peptidbibliothek von Patienten mit chronischem Nierenversagen verwendet, mit dem Ziel, ein menschliches Peptid zu identifizieren, das MLLbcr-Rearrangements verhindert. Daher wurden die Zellen mit Peptiden vorbehandelt, anschließend mit Etoposid oder Doxorubicin behandelt und anschließend einer FACS-Analyse unterzogen, um die GFP-Rekonstitution festzustellen. Nach zwei Runden chromatographischer Fraktionierung und massenspektrometrischer Analyse haben wir ein Peptid identifiziert, das MLLbcr-Umlagerungen in verschiedenen Zelltypen abschwächt, ohne den Zellzyklus oder den Zelltod zu beeinflussen (Bild). Immunfluoreszenzmikroskopie und Chromatin-Immunpräzipitation zeigten, dass das Peptid die nukleäre EndoG-Akkumulation und MLLbcr-Bindung hemmte, während der DNA-Schaden insgesamt nicht durch das Peptid beeinflusst wurde. Zusammengefasst beschreiben wir ein menschliches Peptid, das MLLbcr-Umlagerungen verhindert, indem es die nukleären EndoG-Funktionen stört.