Enzymtechnik
Offener Zugang

Abstrakt

Bewertung und Charakterisierung der durch UV-Mutagenese induzierten Proteaseproduktion durch Bacillus sp.

Neha Karn und Santosh Kumar Karn

 Phänotypische Mutanten von Bacillus sp. wurden durch UV-Bestrahlung entwickelt, um ihre Fähigkeit zur Steigerung der Proteaseaktivität zu testen. Unter den fünf Mutanten erwies sich RS1 als effizienter als andere Mutanten und Wildtypstämme. Die maximale Protease wurde aus dem Zellextrakt des Bacillus sp. RS1-Stamms gewonnen, der zur Reinigung und Charakterisierung verwendet wurde. Das Kulturfiltrat von Bacillus sp. RS1 wurde durch Ammoniumsulfatfällung gereinigt; der kulturgefilterte Überstand wies die höchste spezifische Proteaseaktivität auf und enthielt 86 % des gesamten Proteaseanteils der Kultur. Zur Reinigung der Protease wurde eine Ammoniumsulfatfällung zwischen 40 und 70 % verwendet, die zu einer 20-fachen Steigerung der spezifischen Aktivität im Vergleich zum unkonzentrierten Überstand führte. Die Säulenreinigung führte zu einer 44-fachen Steigerung der spezifischen Aktivität im Vergleich zum unkonzentrierten Überstand von Bacillus sp. RS1. Auf der Grundlage der erhaltenen Ergebnisse wurde festgestellt, dass der mutierte Stamm RS1 für die Reinigung des Proteaseenzyms am besten geeignet ist. Das gereinigte Proteaseenzym hatte eine maximale Aktivität bei einem pH-Wert von 7,0 mit Phosphatpuffer und die optimale Inkubationszeit betrug 24 Stunden. Die aus RS1 isolierte Protease ist bei einem pH-Wert von 8,5 und einer Temperatur von 60 °C stabil, außerdem kann dieses Enzym kommerziell genutzt werden.