Enzymtechnik
Offener Zugang

Abstrakt

Wiederverwendung von Cyclodextrin-Glycosyltransferase durch Immobilisierung auf magnetischen Trägern

Kate Cristina Blanco, Francisco José dos Santos, Natalia Sozza Bernardi, Miguel Jafelicci Júnior, Rubens Monti und Jonas Contiero

CGTase aus Bacillus lehensis, isoliert aus dem Abwasser einer Maniokmühle im Bundesstaat São Paulo, Brasilien, wurde immobilisiert, nachdem sie durch Fällung mit Ammoniumsulfat teilweise gereinigt worden war. Die teilweise gereinigte CGTase wurde durch kovalente Bindung auf einem Magnetitträger immobilisiert, der mit 3-Aminopropyltrimethoxysilan silanisiert und mit Glutaraldehyd aktiviert wurde, was zu einer Ausbeute von 16,27 % und einer Endaktivität von 17,54 % der Anfangsaktivität führte. Die physikochemischen Eigenschaften und die Kinetik der Cyclodextrin-Glycosyltransferase aus Bacillus lehensis wurden bestimmt. Die optimale Temperatur der immobilisierten CGTase war höher als die des löslichen Enzyms (70 °C bzw. 55 °C). Der optimale pH-Wert des immobilisierten Enzyms war der gleiche wie der des löslichen Enzyms (pH 8,0). In den pH- und Thermostabilitätstests blieben nach 24 Stunden 50 % der Enzymaktivität und nach 160 Minuten 26,22 % der ursprünglichen Aktivität erhalten. Die Michaelis-Menten-Konstante betrug 0,82 mg.ml-1 und die maximale Geschwindigkeit 45,45 mol.ml−1.min−1. In der Wiederverwendungsstudie des immobilisierten Enzyms blieben nach vier Zyklen 16,66 % der ursprünglichen katalytischen Aktivität erhalten, was die Möglichkeit zeigt, das auf Magnetit immobilisierte Enzym wiederherzustellen und wiederzuverwenden.