A. Barbati, L. Cesarini, R. Pellegrino, GC Di Renzo, Chia Grenelli
Ziel: Die Messung von Cystatin C (Zyste C) im Urin kann eine sehr gute Methode sein, um Neugeborene mit einer Veranlagung zu Nierenfunktionsstörungen frühzeitig zu identifizieren. PETIA, PENIA und EIA sind immunometrische Methoden zur quantitativen Bestimmung von Zyste C in menschlichen biologischen Flüssigkeiten, sie weisen jedoch gewisse Interferenzen auf und ermöglichen keine qualitative Analyse. In der vorliegenden Studie wird eine Validierung von Immunoblot SDS-PAGE zur Analyse von Zyste C im Urin durchgeführt.
Methoden: Urin wurde von Neugeborenen auf der Säuglingsstation des Krankenhauses S. Maria della Misericordia gesammelt. Zyste C im Urin wurde mittels SDS-PAGE-Elektrophorese, Immunoblot und Messung der optischen Dichte untersucht.
Ergebnisse: Die qualitative Analyse zeigte zwei verschiedene molekulare Formen: eine Reaktivität von etwa 70 kDa in allen Proben und eine Reaktivität von 13 kDa in einer begrenzten Anzahl von Proben. Der Variationskoeffizient für die Testpräzision betrug 10 % und für die Testgenauigkeit ± 10 %. die Nachweisgrenze betrug 0,009 ng/µl und die Kalibrierungskurve wies eine gute Linearität auf (Bereich 0,02–0,3 ng/µl). Die Stabilität von Harnzyste C war auch ohne Verwendung von Proteaseinhibitoren akzeptabel, wenn der Test mit frisch entnommenem oder unmittelbar nach dem Auftauen der Proben bis zu sechs Monate gelagertem Urin durchgeführt wurde.
Schlussfolgerung: Die Immunoblot-SDS-PAGE-Analyse ist eine valide Methode zur qualitativen und quantitativen Analyse von Harnzyste C.