Zeitschrift für Agrarwissenschaft und Lebensmittelforschung
Offener Zugang

Abstrakt

Entwicklung von Rapidot-Immunoassays zum Nachweis des Banana-Bunchy-Top-Virus

Namratha ND, Narayan BM, Chougal A und Chidanand AR

BBTV wurde als Antigen verwendet, um mithilfe der Phagendisplay-Technologie einen Antikörper mit variablem Einzelkettenfragment (scFv) zu produzieren. Zwei Klone mit den höchsten Messwerten im monoklonalen ELISA wurden ausgewählt, nämlich pBSNMAB5 und pBSNMAB40. Einzelketten-Antikörperfragmente von pBSNMAB5 und pBSNMAB40 wurden in den pQUANTa-Body-Expressionsvektor subkloniert, wodurch eine transkriptionelle Fusion mit dem scFv-monoklonalen Antikörperfragment und dem Gen, das für das Enzym alkalische Phosphatase (PhoA) kodiert, ermöglicht wurde. Die Klone wurden mit LMB3-Vorwärts- und pHEN-Rückwärtsprimer sequenziert und charakterisiert. Die scFv-Gene beider Klone waren 795 bp lang, und es wurde festgestellt, dass sie eine ähnliche Homologiesequenz aufweisen. Die Ergebnisse der BLASTn- und BLASTx-Analysen zeigten eine 85-prozentige Homologie mit dem synthetischen Konstrukt des Anti-TNF-Alpha-Einzelketten-Fv-Antikörpergens, partiellen cds, und darüber hinaus ergab die BLASTx-Analyse eine 86-prozentige Homologie mit der variablen Schwerkettenregion des zirkulierenden B-Zell-Antikörpers (Homo sapiens). Nach der Expression des Klons wurde das Fusionsprotein von ALP zusammen mit den monoklonalen Antikörpern pBSNMAB5 und pBSNMAB40 produziert. Das scFv-ALP-Konjugat wurde gegen das BBTV-Protein hergestellt. Unter Verwendung dieses Antikörperkonjugats wurde ein Nachweiskit entwickelt. Dieses Rapidot Immunodiagnostic Kit erkennt BBTV bereits in einer Konzentration von 0,9 g/ml sowohl in der NC-Membran als auch in der Membrankassette und wurde auch mit anderen Proteinen abgeglichen, um die Spezifität der gegen BBTV erzeugten Monoklone zu ermitteln.